实验指导手册

标准化的ISP培养基制备流程，确保实验结果的可重复性和准确性

实验室设备

通用制备流程

适用于所有ISP培养基的标准化制备程序

制备步骤

1

准备工作

清洁工作台，准备所需玻璃器皿和试剂。检查所有化学品的标签和有效期。

2

称量成分

按照配方准确称量各成分。易吸潮的成分应最后称量。微量元素溶液需精确量取。

3

溶解混合

将各成分依次溶解于蒸馏水中。难溶成分可适当加热。淀粉类需先用冷水调成糊状。

4

pH调节

使用pH计或精密pH试纸测定溶液pH值。用1N NaOH或1N HCl缓慢调节至目标pH。

5

定容分装

补充蒸馏水至最终体积。根据用途分装到适当的容器中（试管、锥形瓶等）。

6

灭菌处理

按照培养基类型选择合适的灭菌程序。液体培养基121°C 15分钟，含糖类培养基115°C 20分钟。

可视化指导

  • 实验准备

    实验准备

    确保工作区域清洁，准备所有必需设备和试剂

  • 精确称量

    精确称量

    使用分析天平准确称量各化学成分

  • 溶解混合

    溶解混合

    充分搅拌确保所有成分完全溶解

  • pH测定

    pH测定

    使用校准的pH计精确测定和调节pH值

灭菌程序

不同培养基的专用灭菌条件

过滤灭菌

热敏材料（抗生素，糖源）

无菌滤膜: 0.22 微米
注射器: 无菌
操作条件: 无菌

含糖培养基

ISP2, ISP4, ISP5等

温度: 115°C
时间: 20分钟
压力: 0.7 kg/cm²

常规灭菌

Trace salts solution

温度: 121°C
时间: 15分钟（<500 mL/瓶）
压力: 1.05 kg/cm²

质量控制

确保培养基质量的检测标准和方法

pH值检测

灭菌后培养基的pH值应在规定范围内±0.2

检测方法:

  • • 使用校准的pH计测定
  • • 温度补偿至25°C
  • • 每批次至少检测3个样品

无菌检测

确保培养基灭菌彻底，无杂菌污染

检测方法:

  • • 随机抽取5%的培养基
  • • 25°C培养48-72小时
  • • 观察有无菌落生长

性能测试

使用标准菌株验证培养基的生长促进能力

测试菌株:

  • • Streptomyces coelicolor A3(2)
  • • Streptomyces griseus ATCC 23345
  • • 观察生长速率和形态特征

质量标准

物理性状

  • • 颜色：符合培养基特征
  • • 澄清度：透明无沉淀
  • • 凝固性：固体培养基凝固均匀

生物学性能

  • • 生长促进能力：≥90%标准值
  • • 选择性：抑制非目标菌
  • • 鉴别性：特征反应明显

保存条件

  • • 温度：4°C冷藏保存
  • • 湿度：相对湿度<60%
  • • 有效期：制备后30天内使用

记录要求

  • • 制备日期和批号
  • • 成分来源和批号
  • • pH值和灭菌参数
  • • 质量检测结果

安全须知

实验室安全操作规程和防护措施

个人防护

  • • 穿戴实验服和防护眼镜
  • • 使用一次性手套
  • • 长发需扎起
  • • 禁止在实验室内进食

化学品安全

  • • 仔细阅读化学品标签
  • • 在通风橱中操作挥发性物质
  • • 酸碱操作需特别小心
  • • 化学品泄漏立即处理

设备安全

  • • 高压灭菌器定期检查
  • • 电气设备接地良好
  • • 紧急停止按钮标识清晰
  • • 消防器材定期检查

紧急处理程序

化学品接触

皮肤接触: 立即用大量清水冲洗15分钟

眼部接触: 用洗眼器冲洗，立即就医

误食: 不要催吐，立即就医

设备故障

高压灭菌器: 立即断电，联系技术人员

电气故障: 切断电源，标记危险区域

火灾: 使用灭火器，疏散人员

故障排除

常见问题及解决方案

培养基不凝固或凝固不良

可能原因:

  • • 琼脂用量不足或质量不佳
  • • pH值异常影响凝固
  • • 灭菌温度过高或时间过长
  • • 搅拌不充分导致分布不均

解决方案:

  • • 检查琼脂用量，使用优质琼脂
  • • 重新调节pH至适当范围
  • • 优化灭菌条件
  • • 充分搅拌确保均匀混合

pH值偏离目标范围

可能原因:

  • • pH计未校准或校准不准
  • • 缓冲能力不足
  • • 某些成分影响pH
  • • 温度变化影响pH读数

解决方案:

  • • 使用前校准pH计
  • • 增加缓冲系统浓度
  • • 分步调节pH值
  • • 在室温下测定pH

微生物生长不良

可能原因:

  • • 营养成分不足或比例不当
  • • pH值不适宜
  • • 培养基储存条件不当
  • • 接种量或方法不当

解决方案:

  • • 检查配方和成分质量
  • • 重新调节pH值
  • • 改善储存条件
  • • 优化接种方法