Quantifying MAMP-induced Production of Reactive Oxygen Speci
发布日期：2025-11-04 17:33 浏览次数：
Quantifying MAMP-induced Production of Reactive Oxygen Species in Sorghum and Maize
高粱和玉米中由MAMP诱导产生的活性氧定量分析
Plants have the ability to recognize microbe-associated molecular patterns (MAMPs) and mount a defense response. The level of the MAMP response can vary depending on genetic and environmental factors. The most commonly studied MAMPs are flg22, a peptide epitope from bacterial flagellin, and chitin, a component of the fungal cell wall. Protocols for measuring reactive oxygen species (ROS) production elicited by flg22 and chitin in maize and sorghum are described.
植物能够识别微生物相关分子模式（MAMPs）并启动防御反应。MAMP反应的水平可因遗传和环境因素而异。研究最多的MAMPs是细菌鞭毛蛋白肽段flg22和真菌细胞壁成分几丁质。本文描述了在玉米和高粱中通过flg22和几丁质诱导活性氧（ROS）产生的检测方法。
Samira, R., Zhang, X., Kimball, J., Cui, Y., Stacey, G. and Balint-Kurti, P. J. (2019). Quantifying MAMP-induced Production of Reactive Oxygen Species in Sorghum and Maize. Bio-101: e3304. DOI: 10.21769/BioProtoc.3304.
方法概要：
材料准备：取10 d玉米或15 d高粱第4片展开叶，用3 mm打孔器制2枚叶盘，浮于96孔黑板之50 µL水中，铝箔避光过夜。
试剂配制（终体积50 µL/孔）：玉米：1 µL 2 mg/mL L-012 + 1 µL 2 mg/mL辣根过氧化物酶 + 48 µL 20 mg/mL壳聚糖（或2 µM flg22）。高粱：0.5 µL L-012 + 0.5 µL酶 + 49 µL 100 mg/mL壳聚糖（或2 µM flg22）。mock孔不加MAMP。
ROS检测：反应液加入后即刻置Synergy 2读板，每2 min测化学发光1次，连续1 h共31个点；积分31次光子计数并减去空白，再减mock得ROS爆发量。
设计要点：每系3技术重复+1 mock，整块板设4空白，可测23个基因型；≥2次生物学重复；低背景mock为质控标准。 该方法可在群体水平快速比较不同基因型对flg22/壳聚糖的模式触发免疫（MTI）强度。
