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具有代表性的常用培养基的制作

时间:2010-12-06 12:02
来源:研究小组
作者:admin
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内容介绍
常用培养基的制作
 
1  PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养)Potato Dextrose Agar
  用于大部分病原真菌的培养,为真菌培养通用培养基。
  材料:土豆、葡萄糖、琼脂粉、水(自来水即可)
  称取200 g马铃薯,洗净去皮切片,加水1000 mL煮沸15 min,纱布过滤后加水补足至1000 mL,再加12g葡萄糖和10~12g琼脂粉,煮沸待琼脂粉完全熔化后分装。分装后的培养基应在1 h内灭菌,采用高压蒸汽湿热灭菌,在0.1 MPa蒸汽压下,温度达121 ℃,维持20 min。
分装方法:
  A.三解瓶(锥形瓶)分装。采用250 mL容积的三解瓶分装,每瓶分装约200 mL培养基,瓶口覆透气灭菌封口膜,以棉线扎紧。
  B.试管分装。试管分装制作斜面培养基,主要用于菌种的转接和保存。取20 mL的干净试管,加入培养基约5 mL(1/4试管高度),试管口用脱脂棉制作的棉花塞塞口,7根试管为一组,管口部分用报纸包裹,棉线扎紧。灭菌后应趁热取出,斜放在桌面制成斜面。
注意:试管分装时尽量避免培养基粘粘在管口部分,否则培养基可能粘住棉花塞,影响后续试验操作。
 
2  PD培养基(马铃薯葡萄糖培养基)Potato Dextrose
  用于微生物的发酵培养。
  材料:土豆、葡萄糖、水(自来水即可)
  制作过程同PDA培养基,不同之处在于不添加琼脂粉,制作出的培养基在冷却后为液体状态。
  分装方法:分装方法同PDA培养基。
 
3  CA培养基(胡萝卜琼脂培养基)Carrot Agar
  用于一些特殊真菌的培养,如辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici)的培养及产孢培养。
  材料:胡萝卜、葡萄糖、琼脂、水(自来水即可)
  制作方法同PDA培养基,仅将马铃薯更为胡萝卜。
  分装方法:分装方法同PDA培养基。
 
4  OA培养基(燕麦片琼胶培养基)Oatmeal Agar
  这种培养基培养真菌和放线菌,可促使某些真菌形成孢子或子实体,也适于保存腐霉属和疫霉属真菌的菌种。
  材料:燕麦片、琼脂、水(自来水即可)
  燕麦片30g加水1000mL,煮沸1h,用纱布过滤后补足水至1000mL,加琼脂粉10~12熔化后分装灭菌。琼脂加到15g,可用于较长时期的培养,可促使孢子产生。
  分装方法:分装方法同PDA培养基。
 
5  NA培养基(牛肉膏蛋白胨培养基)Beef Extract Peptone Medium
  用于细菌的培养,如葡萄球菌、链球菌、芽孢杆菌等。
  材料:牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、自来水
  依次准确地称取牛肉膏3 g、蛋白胨10 g、NaCl 5g放入烧杯中,加入少量水搅拌加热使之熔化,定容至1000 mL加入纯化琼脂粉12 g,继续搅拌加热使之熔化。pH值的调节使用1mol/L NaOH和1mol/L HCl进行调节。pH值控制在7.0-7.2之间。
  牛肉膏常用玻棒挑取,放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上,称量后直接放入水中,这时如稍微加热,牛肉膏便会与称量纸分离,然后立即取出纸片。蛋白胨很易吸潮,在称取时动作要迅速。称药品时严防药品混杂,一把牛角匙用于一种药品,或称取一种药品后,洗净、擦干,再称取另一药品,瓶盖也不要盖错。
分装方法:分装方法同PDA培养基。

6  LB培养基(Luria-Bertani培养基)
  LB培养基是一种培养基的名称,生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种,使菌种成倍扩增,达到使用要求。
  LB培养基的配方如下:
  胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L
  酵母提取物(Yeast extract) 5g/L
  氯化钠(NaCl) 10g/L
  另外根据经验值用NaOH调节该培养基的pH,使其达到7.4(该pH适合目前使用最广的原核表达菌种E.coli的生长)用于细菌的培养,如葡萄球菌、链球菌、芽孢杆菌等。
   分装方法:分装方法同PDA培养基。

7  GYM培养基(葡萄糖酵母麦芽培养基)Glucose Yeast Malt
  葡萄糖 4.0 g
  酵母提取物 4.0 g
  麦芽提取物 10.0 g
  碳酸钙 2.0 g
  琼脂 12.0 g
  蒸馏水 1000.0 ml
  在加入琼脂前,用氢氧化钾将PH值调整到7.2(使用 PH值试纸)。如果使用液体培养基,就去除碳酸钙。
  分装方法:分装方法同PDA培养基。
Zotzel J, Keller P, Fuchsbauer H L. Transglutaminase from Streptomyces mobaraensis is activated by an endogenous metalloprotease[J]. European Journal of Biochemistry, 2003, 270(15): 3214-3222.

8    MEA培养基(麦芽膏琼脂培养基)Malt-extract Agar
  Malt extract  20 g
  Glucose 20 g
  Peptone 1 g
  Agar  15 g
  蒸馏水 1000.0 ml
  将PH值调整到4.6±0.2
  分装方法:分装方法同PDA培养基。
  该培养基也有直接使用Malt extract 50 g/L进行配制的,注意根据参考文献选用合适的培养基。

9  CMA培养基(玉米粉培养基)Corn meal Agar
  Corn meal 20 g
  Agar 15 g

10  GPYA培养基(葡萄糖蛋白胨酵母提取物培养基)Glucose peptone yeast extract agar
  Glucose      20 g
  Peptone     5 g
  Yeast extract     5 g
  Agar    15 g
  Distilled water   1 L
  Adjust pH to 5.0-5.2 and sterilize 30 minutes at 110℃. (0.5atm)

11  PCA培养基(马铃薯胡萝卜培养)Potato carrot agar
  Scraped carrots 40 g
  Peeled potatoes 40 g
  Distilled water 1 L
  Grind carrots in blender, cut potatoes in small pieces, boil for 15 minutes, filter through cloth. Sterilize 15 minutes at 121°C.
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